基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用

本发明提供基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用，系统包括同时具有报告/供体功能的载体及Cas9表达载体，所述报告/供体载体包括两条目标基因同源臂以及位于两条目标基因同源臂之间的外源序列片段；两条目标基因同源臂在目标基因上的同源序分别列位于目标基因靶序列的两侧并与目标基因靶序列相接；外源序列片段包括依次排列的启动子、抗性基因、剪切肽序列、报告基因以及polyA尾，抗性基因内部插入有两段该抗性基因的SSA修复同源序列，并且在两段SSA修复同源序列之间插入有目标基因靶序列。本发明构建了一套能够高效定点精确靶向整合外源基因到內源基因序列的敲入系统，而且能够进行较高效率的双染色体等位基因的双敲入。

1.买家委托交易经纪人服务，与交易经纪人签定《交易合同》，并按合同约定付款方式支付款项；

2.交易经纪人确定收到合同约定款项后，与卖家签定《交易合同》，支付合同约定款项；

3.卖家确定收到合同约定款项后，向交易经纪人交付《专利转让委托书》、《转让协议》、《解聘书》各一式两份；

4.交易经纪人确认材料无误后，若买方自行办理转让，则交易经纪人将《专利证书》及转让材料原价交付买方，至此合同完成；

5.若买家委托交易经纪人代办转让手续，交易经纪人确认材料无误后提交办理国家手续，国家专利局1个月左右下发《专利转让手续合格通知书》， 交易经纪人确认转让成功后支付合同约定剩余款项给卖方，并交付《专利证书》、《专利转让手续合格通知书》原件给买方，至此专利转让合同完成。

1.买家交易款项将暂保管于九知网担保账户，九知网全程资金代管，保障买卖双方资金安全。

2.选择委托经纪人服务，均由交易经纪人验证交易品和买卖双方身份信息真实有效性。

3.九知网专属律师事务所将对委托交易全程监督，确保所有交易合同及相关文件合法有效。

4.选择委托经纪人服务，并由九知网向卖家代付定金；待国家知识产权局下发手续合格通知书、并经九知网核实后，支付卖家尾款。

5.选择委托经纪人服务，将由交易经纪人代办国家手续，客户随时可查进度。